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固相萃取小柱的選擇

更新時間:2017-08-22點擊次數(shù):5757

1.固相萃取柱的選擇

  1. 柱填料的選擇

根據(jù)目標化合物與干擾物的差異,如極性,分子量,pka值等,選擇合適的填料。

2 固相萃取柱規(guī)格的選擇

對于反相、正相和吸附型固相萃取柱來說,被萃取樣品的質(zhì)量不超SPE柱填料的5%;

離子交換型的固相萃取柱,必須考慮離子交換的容量。SAXSCX其吸附容量為0.2mg/g,下表附SPE小柱的容量和洗脫參數(shù)

 

SPE柱上樣容量和洗脫體積的選擇

 

規(guī)格

zui大上樣量

zui小洗脫體積

100mg/1mL

5mg

250µL

200mg/3mL

10mg

500µL

500mg/6mL

25mg

1.2mL

1g/6mL

50mg

2.4mL

 

3.選擇合適的固相萃取方法

固相萃取的保留機制可分為兩種:

3-1 吸附劑(填料)保留目標化合物:絕大多數(shù)化合物應用此機制,填料保留其目標組分及少量雜質(zhì)通過淋洗步驟去除吸附在柱上的少量雜質(zhì),zui后選擇合適的(洗脫)溶劑把目標組分洗脫下來。

 

根據(jù)吸附劑的保留機理可進一步分為:

1)反相C18,C8,CN,Phenyl,C4,C1

  1. 分析物:非極性至中等極性
  2. 基質(zhì):水溶性
  3. 方法:

a.活化:通常用水溶性有機溶劑如甲醇活化,然后用水平衡

b.淋洗:含0-50%極性溶劑的緩沖溶液淋洗雜質(zhì)

c.洗脫:極性或非極性溶劑洗脫目標物

2)正相(Silica, Florisil,Diol,NH2

  1. 分析物:中等極性到強極性
  2. 基質(zhì):非極性至中等極性
  3. 方法:

a.活化:非極性有機溶劑

b.洗脫:非極性有機溶劑

 反相溶劑洗脫強度:

己烷

異辛烷

四氯甲烷 

氯fang 

二氯甲烷

四氫呋喃

乙mi

乙酸乙酯

丙酮

乙腈

異丙醇 

甲醇

3)陽離子交換(SCX,PRS,COOH

  1. 分析物:陽離子(堿性)化合物
  2. 方法:
  3. 1.活化:用于非極性有機溶劑中的樣品時,可用樣品溶劑來活化;在用于極性溶劑中的樣品時,可用水溶性有機溶劑過柱后,然后用水平衡,zui后再用適當pH值的緩沖溶液進行平衡。
  • 2.上樣:樣品溶液pH值要小于pKa兩個單位(以保證其帶電荷
  • 3.洗脫:洗脫溶液pH值要大于pKa兩個單位(中和分析物的電荷)
  •  

4)陰離子交換(SAX,PSA,NH2,PAX/MAX

  • 分析物:陰離子(酸性)化合物
  • 方法:
  • 1.活化:用于非極性有機溶劑中的樣品時,可用樣品溶劑來活化;在用于極性溶劑中的樣品時,可用水溶性有機溶劑活化后,然后用水平衡,zui后再用適當pH值的緩沖溶液進行平衡。
  • 2.上樣:樣品溶液pH值要大于pKa兩個單位(以保證其帶電荷 )。
  • 3.洗脫:洗脫溶液pH值要小于pKa兩個單位(中和分析物的電荷)。

 

3-2 吸附劑(填料)保留雜質(zhì):食品中色素等雜質(zhì)的去除多用此機制。填料保留雜質(zhì)而不保留或只保留極少量的目標組分,所以上樣后即開始收集目標組分,zui后用目標物所在的溶劑進一步洗脫。合并兩部分收集液。

1).活化:以樣品所在的有機溶劑進化活化,1-2柱管體積

2).上樣:提取液轉(zhuǎn)移至柱內(nèi),并收集流出液

3).洗脫:用樣品所在的有機溶劑進一步洗脫,收集流出液。合并上樣和洗脫流出液。

附:固相萃取中常見物質(zhì)和處理方法

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